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山东ELISA试剂盒有哪些操作应用领域

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山东ELISA试剂盒有哪些操作应用领域

发布日期:2017-04-10 作者: 点击:

山东试剂


ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于血清流行病学调查。ELISA法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,本法不仅可以用来测定抗体,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大,可概括四个方面:

1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。

2、研究抗酶抗体的合成。

3、显现微量的免疫沉淀反应。

4、定量检测体液中抗原或抗体成份。

操作流程如下:

(1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。 (2)酶标板置4℃,包被过夜。

(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。

(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。 

(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。 

(6)洗板,同(4)。 

(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。 

(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。 

(9)洗板,同(4)。 

(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。 

(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。 

(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。

(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

注:所用溶液配方

(1) PBS:称取0.2g KH2P04, 2.9g Na2HP04?12H20、8.0g NaCl, 0.2g KCl,加双蒸水至1000ml。

(2)包被缓冲液:称取1.59g Na2CO3, 2.938 NaHCO3,加双蒸水至 1000m1。

(3)洗涤液(PBST):含0.05% Tween-20的PBS。

(4)稀释液:含0.1%牛血清白蛋白(BSA)的PBS,主要用以稀释抗体、标准品、样品。

(5)TMB显色液:称取1.84g Na2HP04.12H20, 0.51 g柠檬酸,加双蒸水至1O0ml,配成柠檬酸-磷酸缓冲溶液。用10.5 ml 柠檬酸-磷酸缓冲溶液溶解1锭TMB,再加入35μl 3% H2O2

(6)细胞裂解液:1% TritonX-100,137mmol/L NaCl,20mmol/L Tris-HCl,2mmol/L EDTA,1mmol/L PMSF,pH 7.4。(其中PMSF溶于异丙醇中,配成1O mmo/L,-20℃ 贮存备用。


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