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克隆载体和表达载体有什么不同?

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克隆载体和表达载体有什么不同?

发布日期:2017-04-16 作者: 点击:

克隆载体

克隆载体

克隆载体(Cloning Vector):通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体,在载体上插入合适大小的外源DNA片段,并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中,并在宿主细胞中大量繁殖。常见的载体有质粒,噬菌粒,酵母人工染色体。

对载体的要求:①能在宿主细胞中复制繁殖,而且最好要有较高的自主复制能力。

②容易进入宿主细胞,而且进入效率越高越好。

③容易插入外来核酸片段,插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。这就要求载体DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点。

④容易从宿主细胞中分离纯化出来, 这才便于重组操作。

⑤有容易被识别筛选的标志,当其进入宿主细胞、或携带着外来的核酸序列进入宿主细胞都能容易被辨认和分离出来。

表达载体

表达载体

表达载体四部分:目的基因、启动子、终止子、标记基因

常用细菌质粒进行构建,构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出与目的基因相合的末端(多为黏性末端,也有平末端),采用DNA连接酶连接,导入生物体实现表达。标记基因可帮助识别质粒并检测是否成功整合到染色体DNA中。

表达载体(Expression vectors)就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等),使目的基因能够表达的载体。如表达载体pKK223-3是一个具有典型表达结构的大肠杆菌表达载体。其基本骨架为来自pBR322和pUC的质粒复制起点和氨苄青霉素抗性基因。在表达元件中,有一个杂合tac强启动子和终止子,在启动子下游有RBS位点(如果利用这个位点,要求与ATG之间间隔5-13bp),其后的多克隆位点可装载要表达的目标基因。

克隆载体和表达载体有什么不同?

克隆载体是在克隆过程中用到的各种质粒,比如为了扩增目的基因的高拷贝质粒、为了方便测序的测序质粒、为了连接PCR产物的TA质粒、为了重组的穿梭质粒等等。克隆载体一般有较强的复制能力,利于基因的保存和扩增,而且提供丰富的酶切位点等等。它不必有强启动子,因为不重于表达。

表达载体是基因克隆结束后,为了在特定细胞内表达而构建的。他重点在于表达,有各种各样的启动子适应于不同种类的细胞,并且有各种各样,如诱导等可控的表达调控方式。

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