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山东试剂厂家的动物组织/细胞RNA提取试剂盒

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山东试剂厂家的动物组织/细胞RNA提取试剂盒

发布日期:2017-04-28 作者: 点击:

山东试剂厂家


山东试剂厂家产品简介:

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取组织和细胞的基因组DNA。 离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,能够高效、专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。 提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作,包括酶切、 PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

操作步骤:

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入休积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、样品的处理:

a、细胞:取1×106-1×107个悬浮培养细胞,12000rpm离心1min收集细胞,贴壁细胞先用胰蛋白酶消化处理,再用预冷的PBS吹打成细胞悬液,然后12000rpm离心1min收集细胞,尽量除去上清,加200ul溶液A,振荡至彻底混匀。

b、组织:组织量不宜过大,一般不要超过25mg,可以使用匀浆器匀浆,最好用液氮研磨成粉末状,再用预冷的PBS或无菌水充分悬浮,然后12000rpm离心1min收集细胞,尽量除去上清,加200ul溶液A,振荡至彻底混匀。

2、向悬浮液中加入20ul 的RNase A (10mg/ml),55℃放置15min。

3、加入20ul 的蛋白酶K( 10mg /ml ),充分颠倒混匀,55℃水浴消化,细胞消化时间较短,组织消化时间较长,一般需要1-3个小时才能完成(鼠尾需要消化过夜)。消化期间可颠倒离心管混匀数次,直至样品消化完全为止。消化完全的指标是:液体清亮及粘稠。

4、加入200ul体积溶液B,充分颠倒混匀,如出现白色沉淀,可放置于75℃ 15-30min,沉淀即会消失,不影响后续实验。如溶液未变清亮,说明样品消化不彻底,可能导致提取的DNA量少及不纯,还有可能导致堵塞吸附柱。

5、加入200ul无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响DNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中。

6、12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

7、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇), 12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

8、向吸附柱中加入600ul漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

9、12000rpm离心2min,将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

10、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50-200ul经65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min,12000rpm离心2min。

11、可将离心所得洗脱液再加入吸附柱中,12000rpm离心2min,即可得到高质量的基因组DNA。

注意事项:

1、试剂盒拆封后,RNase A和蛋白酶K需放置-20℃保存。

2、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。

3、如果试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响效果。

4、洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul,体积过小会影响回收效率:洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围),pH 值低于7.0会降低洗脱效率。


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