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土壤基因组提取试剂盒的介绍

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土壤基因组提取试剂盒的介绍

发布日期:2017-05-13 作者: 点击:

土壤基因组提取试剂盒


本试剂盒适合于从褐土、淤泥、火山灰等各种极端土壤环境中提取微生物 DNA。对土壤中各种细菌、真菌

有很好裂解效果,最大限度的保留了微生物DNA的多态性。  

本试剂盒采用我公司特有的腐殖质吸附材料,可高效专一的去除各种腐殖质成分而丝毫不会影响DNA的

产率,纯度较酚、氯仿抽提法提高数倍。  

使用本试剂盒提取的DNA产量大、完整性好,可直接用于各种常规操作,包括酶切、PCR 、文库构建、

Southern  杂交等实验。 

操作步骤: 

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机

在室温下离心。 

1、称取土壤样本 0.1-0.5g,在液氮中充分研磨成细粉末,加入 450ul  溶液A  震荡混匀。  

*  也可直接称取样本 0.1-0.5g 于离心管( 建议使用 2ml  圆底管) ,加入 450ul 溶液 A  剧烈震荡混匀 

1-2min 至没有固体块。  使用液氮研磨效果最佳。  

2 、加入50ul 溶液B  充分颠倒混匀(  不要剧烈震荡),65℃水浴 6min,每2min充分颠倒混匀一次。  

3 、加入100ul  溶液C  充分颠倒混匀(  不要剧烈震荡),12000rpm离心10min   。  

4 、将上清转移到新的离心管,12000rpm离心2min   。  

5 、在吸附柱中加入 200ul  溶液D  ,将离心后的上清加入到带有溶液 D  的吸附柱中,用移液器吹吸几次混

匀,12000rpm离心1min。 

6 、将收集管中的滤出液混匀后重新吸入吸附柱(  必须),12000rpm离心1min。  

7 、倒掉收集管中的废液,在吸附柱中加入漂洗液 500ul,12000rpm离心1min。  

8 、倒掉收集管中的废液,重复步骤 7  两次(共漂洗三次)。  

9 、倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管,12000rpm离心2min   。  

10、拿出吸附柱在室温干燥数分钟(  因季节及气候等因素不等),或50℃干燥1min。  

11 、将吸附柱放入一个新的离心管中,加入 50-100ul  洗脱液(65  ℃预热),12000rpm离心1min。  

12、将离心管中的液体重新加入到吸附柱中,12000rpm离心1min。离心管中即为土壤微生物 DNA 溶液。 

13、若产物PCR 效果差,可以适当稀释 DNA产物,或添加1/10 体积的PCR 增强剂。 

注意事项: 

1 、新鲜的土壤样本会得到更高的产率,不同样本在采样前应先查阅相应的最佳保存条件。  

2 、若溶液中出现浑浊可在 37℃水浴中溶解片刻至清澈,不会影响结果。  

3 、在需要吸取上清液的步骤中应避免吸到沉淀,否则会堵塞吸附柱,并影响产物纯度。  

4 、洗脱缓冲液的体积最好不少于 50ul ,体积过小会影响回收效率;建议使用试剂盒附带的洗脱缓冲液,

用水洗脱也会损失部分产物;DNA应保存在-20  ℃避免反复冻融,以防降解。  

5 、若产物含有腐殖质残余则会严重影响 DNA的光吸收值,应采取电泳检测和分光光度计检测相结合的方

式鉴定。  

6 、液体试剂避免接触皮肤,若意外接触应立即使用大量清水冲洗。 

产品特点:

  1. 应用广泛:适用于不同类型土壤(如粘土、沃土、陶土、沙质土)及其他环境样品(如海洋沉积物、废水、雪水、排泄物)中基因组DNA的提取;

  2。不受腐殖质干扰:同样适用于含高腐殖酸的土壤,只需配制简单的硫氰酸胍,稍改protocol,即可得高产高纯目的基因组DNA;

  3.灵活应用、快速高效:可配合FastPrep®仪器使用,40s裂解细胞,30min完成基因组DNA提取;亦可配合漩涡混匀器或震荡仪使用,60min内即可获得足够量的基因组DNA;

  4.纯度高:基于硅吸附DNA原理的GENECLEAN®纯化柱,保证基因组DNA的高纯度,并直接用于PCR扩增、电泳、酶切及其他下游实验;

  5。无毒无害:不含有毒有害的试剂成分。


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