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土壤基因提取试剂盒说明书

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土壤基因提取试剂盒说明书

发布日期:2017-06-03 作者: 点击:

土壤基因提取试剂盒

土壤基因提取试剂盒说明书:

一、步骤

试剂盒22℃--25℃储存使用前:用无水乙醇稀释SPW Wash Buffer

1、0.5g【500ml】玻璃珠加入15ml离心管中(15ml离心管可以更好的涡旋、悬浮),加0.5g【0.4—0.5g】土样,加1ml Buffer SLX Mlus【裂解菌体】,最高速度涡旋3-5 min; 

2、加100ul Buffer DS,涡旋混匀;  

3、70℃水浴10 min,并短暂涡旋;(对于难提取样品可以在90℃水浴)  

4、3000rpm 室温【25℃】离心3min,转移800ul上清液于一新的2ml离心管中,加入270ul Buffer SP2,涡旋混匀; 

5、冰浴5 min,4℃,13000xg 离心5 min;  

6、小心转移上清液于一新的2ml离心管,加0.7体积【约600—900ul】的异丙醇,反复颠倒离心管20-30次以混合,(若样品DNA含量低,可以放置于-20℃1h );   

7、13000xg 4℃离心10min,获得沉淀DNA; 

8、小心去除上清液,将离心管在吸水纸上倒置1min;  

9、加200ul Elution Buffer,涡旋10s,溶解DNA,【预热EB,保存60℃,15min水浴】;  

10、加100ul HTR Reagent,涡旋10s混匀;(HTR Reagent使用前要摇匀,吸取时将枪头剪大一点儿);  

11、室温静置2min后13000xg 室温离心2min;

12、取上清液于新2ml离心管中(若上清液有黑色则重复步骤10-12);  

13、加上清液的等体积【300—350ul】XP2 Buffer并涡旋混匀; 

14、将HiBind DNA柱置于2ml 收集管中,将上一步样品转移到柱中,10000xg 室温离心1min,弃流液,保留收集管;  

15、将柱移入上一步中的收集管,加入300ul XP2 Buffer,10000xg离心1min,弃流液、收集管;  

16、将柱移入新2ml离心管中,加入700ul SPW Wash Buffer(用无水乙醇稀释过的)洗涤,10000xg 离心1min,弃流液保留收集管;  

17、重复16步;  

18、弃流液,将柱插入空收集管中,13000xg 室温离心2min,空甩干燥柱子;(是为了除去乙醇,乙醇对后续操作有影响) 

19、将柱移入干净1.5ml 离心管,将50ul Elution Buffer 直接加入HiBind matrix 中心,65℃水浴10-15min,室温放置3—5min; 

20、13000xg 离心1min 以洗脱DNA   

21、加入30-100ul Elution Buffer,重复19-20步 

22、检测二、结果 

1、OD值  Nanodrop 2000 analysis 

2、电泳:土样量  6ul;1%琼脂糖凝胶分析 

3、PCR: 20ul体系:  PCR  Mix:10ul  引物:0.3+0.3ul   模板:1ul  加水补齐 预变性:94℃  10 min 变性:94℃  20s 退火:52℃ 20s 延伸:72℃  20s 终延伸:72℃ 5min PCR电泳:  上样量:8ul;1%琼脂糖凝胶分析

23、13000g 离心1min 以洗脱DNA  

24、加入30-100毫升Elution Buffer,重复19-20步。

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