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病毒RNA提取试剂盒介绍及使用步骤

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病毒RNA提取试剂盒介绍及使用步骤

发布日期:2017-06-03 作者: 点击:

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病毒RNA提取试剂盒介绍及使用步骤:

产品介绍:

采用特异性结合病毒RNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,病毒RNA提取试剂盒适合于从无细胞体液,包括血浆、血清、腹水、培养细胞上清液、脑脊髓液及尿液等中快速提取高纯的病毒RNA。该产品可以满足绝大多数的病毒RNA的提取要求, 如病毒RNA:HCV(丙肝病毒),HIV(艾滋病毒),和HTLV(人类嗜T淋巴细胞病毒);等等。病毒裂解后,RNA后在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的病毒RNA从硅基质膜上洗脱。纯化后的病毒核酸无杂质和PCR抑制剂,可直接适用于PCR/RT-PCR等分析。

操作步骤:

(实验前请先阅读注意事项)  提示:第一次使用前请先在10ml漂洗液RW中加入40ml无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!

 1.200μl血清等体液(需回复到室温,不足可用0.9% NaCl或者PBS补足)转入上述1.5ml离心管,加入400μl 裂解液RLB, 立刻涡旋振荡充分混匀。 

2.室温(15-25℃)放置10分钟,每隔5分钟,振荡混匀一次。

3.加入450μl无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀。如果周围环境高于25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。

4.将上述混合物加入一个吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液。如果总体积超过750μl,可分两次将溶液加入同一个吸附柱RA中。

5.加500μl去蛋白液RE,12,000rpm离心30秒,弃废液。

6.加入500μl漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30秒,弃废液,加入500μl漂洗液RW,重复一遍。

7.将吸附柱RA放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

8.取出吸附柱RA,放入一个RNase free的离心管中,在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free H20(事先在 65-70℃水浴中加热效果更好),室温放置1分钟,12,000rpm 离心1分钟。如果想得到较多量的RNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,12,000rpm离心1分钟。洗脱体积越大,洗脱效率越高。如果需要RNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是最小体积不应少于20μl,体积过小降低洗脱效率,减少RNA产量。

9.RNA病毒建议最好立刻使用,否则立刻短期放置在-70℃备用。

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