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核酸提取纯化

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核酸提取纯化

发布日期:2019-01-12 作者: 点击:

核酸提取纯化

核酸提取纯化

分离纯净、完整的RNA分子对于分子克隆的实验非常重要,而且是进行基因表达分析的基础。在总RNA中,75-85%为rRNA(主要是28S-26S/23S和18S/16S rRNA),其余的由分子量大小和核苷酸序列各不相同的mRNA和小分子RNA如tRNA、5S rRNA、5。8S rRNA、miRNA、siRNA、小核RNA(small nuclear RNA,snRNA)及核仁小分子RNA(small nuceolar RNA,snoRNA)等组成。RNA提取与纯化技术是基因克隆、cDNA文库构建、蛋白质体外翻译、RNA序列分析及Northern Blot等技术所必需的,评价RNA质量的两个关键指标是其完整性和纯度。

miRNA提取

MicroRNAs (miRNAs)是小型的、高度保守的RNA分子,如小干扰RNAs (siRNAs),通过与他们的碱基配对调节其同源mRNA的分子表达,以预防通过各种机制的表达。 他们已成为进行发育、细胞增殖、分化和细胞周期的重点监管机构。采用miRNA分离纯化试剂盒可以从新鲜或冷冻组织、细胞中进行高效提取。

基因组DNA提取

制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究以及基因诊断的重要步骤,通常要求得到的片段长度不小于100~200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素,以保证DNA的完整性,为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有10^7-9bp,可以从新鲜组织、培养细胞或低温冻存的组织细胞中提取,可采用传统方法,及在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞,随后用酚抽提而实现,也可用提取基因组DNA的试剂盒,该方法得到的DNA酶切后可用于Southern分析,还可用于PCR的模板、文库构建等实验。

质粒抽提

质粒抽提方法即去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒。按照产量可分为微量提取(微提)、中量提取(中提)、大量提取(大提),提取方法有一般提取(质粒粗提,如用于酶切鉴定)和试剂盒提取(质粒精提,如用于细胞转染)。


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