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DNA提取试剂盒的选择

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DNA提取试剂盒的选择

发布日期:2019-03-19 作者: 点击:

DNA提取试剂盒

实验室工作中,经常会需要用到纯化的DNA,这时我们通常需要使用一个商业的DNA提取试剂盒对目的DNA进行分离纯化。市面上有很多类型的提取试剂盒,当使用不太熟悉的样本类型时,选择合适的盒子是尤为关键的。

一、试剂盒组分

目前大多数DNA提取试剂盒遵循相同的基本步骤: 裂解,柱纯化,洗涤杂质,柱洗脱。然而,不同的盒子在完成每个步骤的方式上有很大的不同。

二、使用的样本类型

不同的DNA来源有不同的试剂盒,从实验室培养的细胞,到临床样本,土壤样本,甚至指纹,也有许多专门用于某些应用的试剂盒。例如,土壤中的腐殖酸或血液中的血红蛋白会污染纯化的DNA,从而干扰下游的DNA实验(如PCR)。当然,也有一些试剂盒会在进行纯化步骤之前专门去除这些组分。如果想从PCR或琼脂糖凝胶中纯化DNA,有许多方法可以提高琼脂糖凝胶纯化的回收率。

三、基因组 VS 质粒DNA提取

一般来说,质粒DNA分离要比基因组DNA分离温和。这是因为针对质粒DNA的裂解步骤需要染色体DNA与细胞蛋白片段保持结合,以防止其污染最终的样品。两种类型的DNA回收都有试剂盒,甚至有可以同时纯化基因组DNA和总RNA的试剂盒。

四、细胞系 VS 生物体

在选择DNA提取试剂盒时,最重要的变量可能是你所使用的生物体。

1。 细菌:许多试剂盒都有用于细菌DNA分离的不同成分,这些试剂盒之间的主要区别在于细胞是如何被分解的,因为有些细菌比其他细菌更更有挑战性。例如,形成生物膜的细菌可能比传统的基于去垢剂的方法需要更强的裂解技术。

2。 动物组织:用于动物组织DNA分离的试剂盒通常具有更温和的裂解技术,因为大多数动物细胞不像细菌细胞那样有细胞壁。然而,动物组织DNA提取的挑战往往在于选择合适的组织匀浆方法。此外,许多动物DNA纯化试剂盒不使用苯酚/氯仿萃取或乙醇作为沉淀步骤,以减少破坏DNA的风险。

3。 植物:当涉及到植物DNA分离时,必须考虑到其他一些因素,需要注意污染物的去除。植物在纯化过程中通常含有未分离的糖,因此,洗涤剂选择性地与DNA结合并从溶液中析出,通常是先将洗涤剂溶解在高浓度的盐溶液中,然后提取DNA。

4. 血液:由于技术上的许多最新进展,血液DNA分离试剂盒中有多种裂解技术和提取方法可供选择。从血液中分离出的DNA将在很大程度上决定你使用的裂解和提取的类型。无论应用是什么,一定要选择一种能够提供纯净、完整、双链和浓缩DNA的试剂盒,以获得最佳效果。

五、你需要多少DNA ?

大多数DNA分离试剂盒公司都提供含有类似成分的试剂盒,这种试剂盒可以根据处理样品的体积进行缩放。如下是一个基于大肠杆菌的DNA分离试剂盒推荐样本体积的纲要,范围很广。对于特殊的应用,当涉及到培养物或组织样本的数量时,选择可能较少。

小量制备: >15 mL

中量提取: 15-25 mL

大规模制备: 100-200 mL

巨型制备: 500-2,500 mL

甚至高达2.5-5升!

六、时间成本:生产率的考虑

当一次处理超过50个样本时,不再考虑使用小量柱纯化,高通量DNA提取试剂盒是更好的选择,它可以以96孔的形式运行,以便在需要同时处理多个样本的DNA的实验。

DNA提取试剂盒有各种规格和大小,然而,共同的主线是,所选择的试剂盒能产生干净和浓缩的DNA。可以定期评估DNA提取物的数量和质量,以确保试剂盒适合此应用类型。

相关标签:DNA提取试剂盒的质量怎么看

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